Иммуиоферментиый анализ



ИФА применяют для выявления антигена в материале от больного или антител в сыворотке крови с определением их принадлежности к иммуноглобулинам различных классов.

ИФА включает два этапа:

- взаимодействие антител с антигеном;

- ферментативную индикацию образовавшегося комплекса «антиген-антитело» за счёт введения меченных ферментом антител.

Меченые антитела связываются с комплексом «антиген-антитело», после добавления субстрата-хромогена за счёт фермент-субстратного взаимодействия реакционная смесь приобретает окраску, которую регистрируют визуально или спектрофотометрически.

Существуют два варианта ИФА: гетерогенный (твердофазный) и гомогенный (жидкофазный). Гомогенный ИФА осуществляют в однофазной системе — в растворе. Твердофазный ИФА основан на феномене иммуносорбции — иммобилизации антител или антигенов на нерастворимых носителях (поверхность лунки полистиролового планшета или полистироловых шариков).

В практической деятельности предпочтение отдано твердофазному варианту. Твердофазный ИФА может быть проведён в варианте определения антигена или антител неконкурентным (прямым) или конкурентным методом.

Неконкурентный ИФА имеет две модификации: сэндвич-метод и антигло-булиновый ИФА. Антиглобулиновый ИФА позволяет определить в сыворотке крови антитела с учётом их изотипа, что даёт возможность установить период инфекционного процесса.

Принцип конкурентного ИФА в том, что искомые антитела или антиген конкурируют с конъюгатом таким образом, что их минимальные концентрации вытесняют конъюгат и связываются с адсорбированными на твёрдой фазе комплементарными антигеном или антителами соответственно. При определении антигенов возбудителя рекомендовано проведение ИФА в двух вариантах: использование неконкурентного метода на первом этапе и конкурентного как подтверждающего специфичность реакции — на втором (например, использование подтверждающей ИФА тест-системы при выявлении HBsAg).

По сравнению с ранее описанными методами ИФА обладает существенными преимуществами:

- высокой чувствительностью, позволяющей выявлять до 0,05 нг/мл антигенного материала;

- высокой специфичностью за счёт использования моноклональных антител, взаимодействующих со строго определёнными эпитопами анализируемых антигенов;

- возможностью использования минимального объёма исследуемого материала (1-2 мкл);

- автоматизацией всех этапов проведения исследования.

В настоящее время ИФА широко применяют для диагностики инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов. Наиболее важное значение метод имеет в диагностике вирусных инфекций — ВГВ, вирусного гепатита С (ВГС) и вирусного гепатита D (ВГВ), ВИЧ-инфекции, герпесвирусной, ротавирусной, аденовирусной инфекции и др. В диагностике ВИЧ-инфекции ИФА играет роль скринингового исследования для выявления суммарных антител к антигенам ВИЧ; положительный результат требует подтверждения методом иммунного блоттинга. семга под шубой


Copyright © infectos.ru
Эффективная защита от вирусов. Инфекционные заболевания. Диагностикий центр.